<th id="7ykua"><track id="7ykua"><dl id="7ykua"></dl></track></th>

    <em id="7ykua"></em><dd id="7ykua"><pre id="7ykua"></pre></dd>
    <strike id="7ykua"><p id="7ykua"><i id="7ykua"></i></p></strike>
    1. <rp id="7ykua"><object id="7ykua"></object></rp>
    2. <rp id="7ykua"></rp>
    3. <em id="7ykua"><acronym id="7ykua"></acronym></em>
        1. 歡迎進入江西倍思特實驗室設備有限公司3官網 
          在線留言|聯系我們

          各類實驗室設備服務商銷售、施工和后期服務一站式服務

          服務熱線: 18170862389  
          歡迎咨詢

          熱門搜索關鍵詞: 實驗室家具系列實驗室通風系統實驗室凈化工程實驗室集中供氣核酸檢測室(PCR)實驗室儀器設備實驗室儲柜系列實驗室裝修工程

          首頁 »新聞中心

          PCR 實驗室的潛在污染來源



          ①臨床標本中存在的大量待測微生物或待測靶核酸


          ②科研中得到的質??寺?/p>


          ③以前分析研究的特定微生物或靶核酸


          ④大量存在于實驗環境中的特定微生物或靶核酸


          ⑤以前擴增產物的殘留污染,這也是 PCR 實驗室容易產生的將造成假陽性的“污染”。 


          PCR擴增可以引起實驗室中擴增產物的累積,通常一次典型的PCR 擴增可以產生109拷貝的靶序列,如果氣溶膠化,甚至小的氣溶膠都會含有106拷貝的擴增產物。如果不加以控制,在短期內累積的氣溶膠化的擴增產物即會污染實驗室中的試劑、儀器設備和通風系統,從而造成嚴重的實驗室“污染”,出現大量的假陽性結果。


          02

          ?PCR 實驗室的防污染措施?


          進行PCR操作時,操作人員應該嚴格遵守一些操作規程,大程度地降低可能出現的PCR污染或以防污染的出現。


          (一) 劃分操作區



          目前,普通PCR尚不能做到單人單管,實現完全閉管操作,但無論是否能夠達到單人單管,均要求實驗操作在三個不同的區域內進行,PCR的前處理和后處理要在不同的隔離區內進行:


          1.  試劑準備區。


          2.標本制備區。


          3.  PCR擴增區及分析區。


          各工作區要有隔離,操作器材,要有方向性。如:試劑準備→標準制備→PCR擴增區及分析區。


          切記:任何一間的產物及器材不要拿到其他兩個工作區。


          (二) 分裝試劑


          PCR擴增所需要的試劑均應在生物柜、裝有紫外燈的工作臺或負壓工作臺配制和分裝。加樣器和吸頭需固定放于其中,不能用來吸取擴增后的DNA和其他來源的DNA:


          1.PCR用水應為高壓的雙蒸水;


          2.引物和dNTP用高壓的雙蒸水在無PCR擴增產物區配制;


          3.引物和dNTP應分裝儲存,分裝時應標明時間,以備發生污染時查找原因。


          (三) 實驗室的嚴格分區及工作程序的嚴格遵守


          試劑準備區、樣本準備區、擴增區、檢測區等須備有其各自需要的儀器設備、工作服、手套、加樣器和通風系統。在每個區使用的試劑和廢物,須直接在其各自的區域內分裝或包裝。操作人員須注意以防通過他們的頭發、眼鏡、首飾和衣服將擴增產物從污染區攜帶至清潔區的可能性。


          (四)化學方法


          實驗臺面可使用10%的次氯酸鈉(漂白劑)清洗,然后再用70%乙醇或清水洗去次氯酸鈉。次氯酸鈉具有氧化損傷核酸的作用,從而使可能的留在實驗臺面的擴增產物被破壞掉。要注意的是,次氯酸鈉不能區分提取的目的 DNA 和 PCR 擴增產物,用次氯酸鈉處理的樣本不能用于核酸擴增檢測。在實際工作中,有些物品比如放置擴增反應管的盤須從污染區轉回到清潔區時,在轉回之前,應將其置于2%~10%的次氯酸鈉溶液中過夜,并充分沖洗。


          (五)擴增產物的修飾


          如對以前擴增產物進行適當修飾,應可以消除其污染后面新的擴增檢測,但為不影響靶核酸的擴增檢測,擴增產物修飾方法須遵循兩個基本原則:


          一是擴增產物被修飾后,應可以與隨后打增的靶序列區分


          二是修飾不能干擾正常的擴增檢測。


          (六) 實驗操作注意事項



          盡管擴增序列的殘留污染大部分是假陽性反應的原因,樣品間的交叉污染也是原因之一。因此,不僅要在進行擴增反應是謹慎認真,在樣品的收集、抽提和擴增的環節都應該注意:


          1.  戴一次性手套,若不小心濺上反應液,立即更換手套;


          2.  使用一次性吸頭,嚴禁與PCR產物分析室的吸頭混用,吸頭不要長時間暴露于空氣中,避免氣溶膠的污染;


          3.  避免反應液飛濺,打開反應管時為避免此種情況,開蓋前稍離心收集液體于管底。若不小心濺到手套或桌面上,應立刻更換手套并用稀酸擦拭桌面;


          4.  操作多份樣品時,制備反應混合液,先將dNTP、緩沖液、引物和酶混合好,然后分裝,這樣即可以減少操作,避免污染,又可以增加反應的準確度;


          5.  后加入反應模板,加入后蓋緊反應管;


          6.  操作時設立陰陽性對照和空白對照,即可驗證PCR反應的可信性,又可以協助判斷擴增系統的可信性;


          7.  盡可能用可替換或可高壓處理的加樣器,由于加樣器容易受產物氣溶膠或標本DNA的污染,使用可替換或高壓處理的加樣器。如沒有這種加樣器,至少PCR操作過程中加樣器不能交叉使用,PCR產物分析所用加樣器不能拿到其它兩個區;


          8.  重復實驗,驗證結果,慎下結論。


          03

          ?實驗室污染的監測?

          一個好的實驗室,要時刻注意污染的監測,考慮有沒有污染是什么原因造成的污染,以便采取措施,預防和消除污染。


          對照試驗


          1、陽性對照:在建立PCR反應實驗室及一般的檢驗單位都應設有PCR陽性對照,它是PCR 反應是否成功、產物條帶位置及大小是否合乎理論要求的一個重要的參考標志。陽性  對照要選擇擴增度中等、重復性好,經各種鑒定是該產物的標本,如以重組質粒為陽性對照,其含量宜低不宜高(100個拷貝以下)。但陽性對照重組質粒及高濃度陽性標本,其對檢測或擴增樣品污染的可能性很大.因而當某一PCR試劑經自己使用穩  定,檢驗人員心中有數時,在以后的實驗中可免設陽性對照。


          2、陰性對照:每次PCR實驗務必做陰性對照。它包括①標本對照:被檢的標本是血清就用鑒定后的正常血清作對照;被檢的標本是組織細胞就用相應的組織細胞作對照。②試劑對照:在PCR試劑中不加模板DNA或RNA,進行PCR擴增,以監測試劑是否污染。


          3、重復性試驗


          4、選擇不同區域的引物進行PCR擴增


          04

          ?實驗室污染的消除?


          實驗室一旦發生污染,檢測工作應立即停止,直到確認消除污染后才能重新開始檢測。要查找污染源和明確污染范圍。然后,根據污染源和污染范圍采取去污染措施,結合各種不同方法以達到好效果。


          1.標本污染生物柜的操作臺造成局限污染時:


          立即用吸水紙覆蓋,并使用0.55%含氯消毒劑進行噴灑消毒。消毒液需要現用現配,24小時內使用。


          2.標本傾覆造成實驗室污染時:


          保持實驗室空間密閉,避免污染物擴散。立即使用潤濕有0.55%含氯消毒劑的毛巾覆蓋污染區。需要時(如大量溢撒時)可用過氧乙酸加熱熏蒸實驗室,劑量為2g/m3,熏蒸過夜;或20g/L過氧乙酸消毒液用氣溶膠噴霧器噴霧,用量8ml/m3,作用1-2小時;需要時或用高錳酸鉀-甲醛熏蒸:高錳酸鉀8g/m3,放入耐熱耐腐蝕容器(陶罐或玻璃容器),后加入甲醛(40%)10ml/m3,熏蒸4小時以上。熏蒸時室內濕度60%-80%。


          3.清理污染物時:


          嚴格遵循活病毒生物操作要求,采用壓力蒸汽滅菌處理,并進行實驗室換氣等,以防再次危害。


          05

          ?新冠病毒核酸檢測常見問題?


          1、新冠試劑出現翹尾,怎么處理?


          答:如果是個別單一通道翹尾,不管是FAM還是VIC通道,先按照要求復查,復查建議重新采樣,如果不方便重新采樣建議對原有樣本進行重新提取核酸驗證,如果復查陰性判讀陰性,如果復查還是同一通道翹尾,就要對結果仔細審核,一是要排除實驗室污染,二是要對病人信息了解清楚,從臨床癥狀及接觸史排查,如果沒法確認,建議須重新采樣復查,如有需要可以采用另一家試劑來驗證。如果出現大量的弱陽性擴增翹尾,主要原因是考慮實驗室污染,可以通過做環境樣本和陰性對照做驗證排除。


          2、N基因和1ab基因是新冠病毒的基因嗎,靈敏度哪個更高?是否會和其他冠狀病毒片段重疊?


          答:N基因跟1ab都是特異的,不會跟其他呼吸道病原體交叉反應。設計時候,兩個基因的序列不一樣,導致靈敏度不一樣,N基因的靈敏度比1ab靈敏度高。


          3、新冠檢測結果和臨床診斷不符合,怎么解讀?


          答:新冠病毒由于是RNA病毒,容易降解,另外檢測結果也和取樣,核酸提取以及樣本本身的核酸濃度有關,需要逐一分析,同時可以結合臨床癥狀判讀。


          4、采用生理鹽水做陰性對照,內標也會增長,怎么解釋?


          答:因為試劑采用的是內源性內標,內源性內標是用人源基因標記,此基因存在于人的表皮細胞內,操作過程中就可能會出現人源性的污染,另外環境污染也有可能導致內標增長,這也是前面提到的建議做環境樣本質控。


          5、新冠樣本內標不出如何處理?


          答:如果新冠樣本內標不出,該樣本須復查,可重新混勻該樣本提取核酸,如果重新提取該樣本內標還是不出,在排除提取問題的情況下,說明采樣不合格,要通知臨床重新采樣復查。


          6、采集環境樣本檢測新冠狀病毒,為啥大部分樣本內標不出,偶爾個別樣本檢測出內標?


          答:因為新冠試劑檢測的是人內源性內標,環境樣本一般不含有人源細胞,所以檢測不出內標;偶爾檢出內標,可能該環境樣本上有人源性細胞粘附,故而檢出內標。


          上一篇:通風柜的操作須知下一篇:實驗室潔凈系統裝修
          聯系我們
          電話:
          18170862389

          江西倍思特實驗室設備有限公司

          電話:0791-85988289

          手機:18170862389 劉

          QQ:83478622

          郵箱:bst0791@163.com

          傳真:0791-85988289

          公司地址:南昌迎賓中大道1155號銀海藍天4單元902室


          聯系方式

          江西倍思特實驗室設備有限公司

          電話:0791-85988289

          手機:18170862389 劉

          QQ:83478622

          郵箱:bst0791@163.com

          傳真:0791-85988289

          公司地址:南昌迎賓中大道1155號銀海藍天4單元902室


          版權所有?江西倍思特實驗室設備有限公司   技術支持:江西華邦LOGO黑.png

          備案號:贛ICP備17003941號-1



          北京富婆对白精彩偷拍,软萌小仙白丝开档JK自慰滴蜡,八戒八戒手机在线观看,中文乱码免费一区二区三区 亚洲综合天堂AV网站在线观看| 久久精品人人槡人妻人人玩| 免费观看的AV毛片的网站| 国产成人无码短视频| 日本激情在线看免费观看|